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蝴蝶兰花梗的组织培养研究

时间:2015-5-14 浏览数:4744
蝴蝶兰属热带气生兰,多产于亚洲,其株型美观、色彩艳丽、花期持久,在热带中有“兰花皇后”之美称,是兰科植物中栽培最广泛、最普及的种类之一.是国际上最具有商业价值的四大观赏热带兰之一.由于它的原生种只有20多种,观赏性较差.所以,商业上用于大规模生产的品种多为杂交种,其品种繁多,易栽培,深受人们的喜爱.但由于蝴蝶兰是单茎性气生兰,很难进行分株繁殖,常规情况下种子发育不完全,极难萌发,因此世界上多采用组织培养来繁殖种苗.例如台湾及东南亚一些国家利用组织培养技术对蝴蝶兰进行了工厂化生产,并出口欧美获得了较大的经济效益[1].目前,随着植物组织培养技术在植物快繁上的应用,它已成为我国兰花快速繁殖的重要手段.近年来,对蝴蝶兰的组织培养研究较多的是用胚[2]、幼叶、茎尖和根尖[3]、花梗腋芽[4]等多种器官为外植体进行组织培养研究,增殖效果不佳,蝴蝶兰组培试管苗[5]的生产研究还处于初级阶段,尚未进入大规模工厂化生产.笔者仅以蝴蝶兰花梗为材料,进行快速繁殖,获得了蝴蝶兰优良品种.现将外植体通过原球茎形成再生植株的全过程报道如下,以期为兰花的快速繁殖提供参考.

取温室栽培蝴蝶兰植株的整枝花梗,先经自来水冲洗干净,再经70%的酒精灭菌30s后,经0 1%HgCl2溶液浸泡10min,无菌水冲洗5次,然后剥去苞叶,将花梗剪成长约1 5-2mm的薄片,平放在固定培养基上.

诱导外植体分化原球茎的培养基为MS+6-BA1-2mg·L-1,继代增殖原球茎的培养基为MS+6-BA3mg·L-1+2.4-D0.01mg·L-1+水解乳蛋白500mg·L-1,分化菌的培养基为MS+6-BA3-5mg·L-1+活性炭0 1%,生根培养基为MS+IBA0.1mg·L-1.上述培养基均含蔗糖2%,琼脂0 .8%,pH5 .6~6. 0,培养温度25℃,每日光照12h,光照强度2000lx.

以花梗诱导原球茎的形成取蝴蝶兰幼嫩花梗作外植体,接种到诱导分化原球茎的培养基上,培养2周左右,可见外植体膨大,呈淡绿色半球状,继续培养1个月,可见表面的突起形成圆球状,2个月后,圆球状的突起增多,长成桑果状原球茎.诱导率可达77%原球茎的继代增殖将原球茎切下转接到继代增殖的培养基上,在同样的条件下培养,就能产生许多原球茎.如此重复,可达到大量繁殖的效果.

器官分化和小植株的形成切割一部分原球茎,培养于不含生长素的苗分化培养基上,2周后,原球茎陆续分化出芽,1个月后,生长形成小叶,继续培养2个月左右,长成有2-3片叶的小苗,将苗转到生根培养上,培养1个月后,生根而成完整再生植株.

通过原球茎(又称原球茎状球体)发生途径快速繁殖蝴蝶兰.关于原球茎的发生,在球茎及鳞茎类植物和组织培中较常出现,在大蒜、百合、番红花、大花君子兰等植物中均有报道,一般只根据外部形态的观察称外植体上产生的这些平滑、圆形的突起为球状.Havranek等认为,这样球状体是具有分生能力,不会产生任何茎或根的原基,最后停止发育.但近年来,在大蒜、番红花、君子兰的组织培养中证明,由这些植物培养所产生的球状体可分化产生茎或根,而形成再生植株,所以球状体有些资料上又称为原球茎.从蝴蝶兰的试验中也证明,通过球状体(更确切地说原球茎)的分割与继代增殖培养,而可获得大量的蝴蝶兰试管苗,因此,原球茎的形成是蝴蝶兰快速繁殖的一个重要手段.

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